細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 人心肌細(xì)胞

組織來源 心臟組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 人心肌細(xì)胞分離自心臟組織；心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成，左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣），這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心肌細(xì)胞呈菱形、多邊形等不規(guī)則形狀；細(xì)胞培養(yǎng)2 h后開始貼壁，呈梭形；到12 h左右，細(xì)胞開始伸出偽足，呈菱形、多角形；細(xì)胞分離培養(yǎng)48 h以后，大部分伸出偽足、呈巴掌狀，部分心肌細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)搏動(dòng)；心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點(diǎn)，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動(dòng)，且心肌細(xì)胞的培養(yǎng)具有簡(jiǎn)便、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點(diǎn)。利用培養(yǎng)的心肌細(xì)胞在探索非血液動(dòng)力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié)，研究心肌細(xì)胞的生物力學(xué)、凋亡、受體下調(diào)、缺血預(yù)處理、信號(hào)通路、對(duì)作用于心臟的新藥進(jìn)行篩選并對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)以及從培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中提取有價(jià)值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人心肌細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法，并用化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人心肌細(xì)胞經(jīng)α-Sarcomeric actin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、 多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）

培養(yǎng)基： 人心肌細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 梭形、多角形

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。