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細(xì)胞系轉(zhuǎn)染與分子載體新技術(shù)與產(chǎn)品的介紹

選擇哪種細(xì)胞系轉(zhuǎn)染方法通常需要綜合多方面的考慮因素，比如靶向的細(xì)胞類型，傳遞的分子種類，以及轉(zhuǎn)染效率哪家強(qiáng)等等諸如此類的問題。我們認(rèn)為，“zui吸引人的方法就是zui簡單的方法，即化學(xué)轉(zhuǎn)染方法”。大體來說，傳統(tǒng)的化學(xué)和物理轉(zhuǎn)染方法就能滿足大部分研究人員的需要，因?yàn)橐话愕目蒲胁捎玫亩际且子谵D(zhuǎn)染和培養(yǎng)的細(xì)胞系。但是這些方法常常是有毒的，而且當(dāng)面對(duì)原代細(xì)胞、干細(xì)胞或其他難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型的時(shí)候，化學(xué)方法的轉(zhuǎn)染效率就較低了。相對(duì)來說病毒載體方法對(duì)范圍較廣的細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染效率就相當(dāng)高了，...

重組原代細(xì)胞因子的狀態(tài)

重組原代細(xì)胞因子要求：1.真實(shí)性：重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析；必要時(shí)應(yīng)用SDS-PAGE,RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測其真實(shí)性。2.純度：應(yīng)用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度。3.生物活性：進(jìn)行相應(yīng)的體外(invitro)或體內(nèi)(invivo)活性檢測。4.蛋白含量：通過紫外光譜分析，SDS-PAGE電泳檢測；必要時(shí)應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。5.內(nèi)毒素：kineticLAL法檢測內(nèi)毒素。6.微生物：重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。重組...

分享活腫瘤細(xì)胞表面受體配體結(jié)合檢測的新技術(shù)

Tag-lite是SNAP-Tag與HTRF技術(shù)相結(jié)合，用來進(jìn)行活腫瘤細(xì)胞表面受體分析的一種技術(shù)。SNAP和CLIP是小的融合標(biāo)簽蛋白，可特異地與底物通過芐甲基不可逆共價(jià)結(jié)合，其底物分別為芐甲基鳥嘌呤（BG）和芐甲基胞嘧啶（BC）。由于底物可與各種染料形成衍生物，這樣，通過共價(jià)反應(yīng)，染料就標(biāo)記到SANP或CLIP上了。SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白質(zhì)的N端或C端，所以我們可以構(gòu)建SNAP或CLIP與目標(biāo)蛋白的表達(dá)載體。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、融合蛋白表達(dá)后，加入標(biāo)記了熒光染料的...

實(shí)驗(yàn)鼠有助攻克細(xì)胞株療法難題

研究人員介紹，人類胚胎細(xì)胞株可分化成人體內(nèi)的各種細(xì)胞及組織，所以對(duì)治療人類重大疾病有巨大潛力。但目前干細(xì)胞療法發(fā)展面臨的一個(gè)主要瓶頸就是移植后的免疫排斥。新研究的成功關(guān)鍵在于開發(fā)出一種“人源化”實(shí)驗(yàn)鼠。徐洋表示，雖然小鼠和人的免疫系統(tǒng)有很多相似處，但它們也有很多不同的地方，所以小鼠模型中獲得的關(guān)于防止免疫排斥的策略在人的臨床試驗(yàn)中大多以失敗告終。為解決這個(gè)問題，他們將人胚胸腺及胚肝中的造血干細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)，培育出“人源化”實(shí)驗(yàn)鼠，它們會(huì)有效排斥異體人類胚胎干細(xì)胞分...

判斷原代細(xì)胞活性是否正確工作的原理

原代細(xì)胞活性是判斷體外培養(yǎng)細(xì)胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標(biāo),如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。目前常用的方法有很多,如有臺(tái)盼藍(lán)染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素?fù)饺敕āTT法等。本文總結(jié)了一些常用的細(xì)胞活性檢測方法的原理、特點(diǎn)，并對(duì)比了各自的優(yōu)缺點(diǎn)。一、染色計(jì)數(shù)法1.化學(xué)染色法染色計(jì)數(shù)法是細(xì)胞培養(yǎng)中檢查細(xì)胞死活zui常用的方法，直接利用死細(xì)胞和活細(xì)胞對(duì)染料的不同親和力，檢查細(xì)胞活性，能在光學(xué)顯微鏡下觀察到染色結(jié)果。可分為兩類：死細(xì)胞著色法和活細(xì)...

詳解原代細(xì)胞凍存的步驟

（1）選擇處于對(duì)數(shù)生長期的原代細(xì)胞，在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培...

胰酶不能去除對(duì)原代細(xì)胞影響的原因

原代細(xì)胞消化時(shí)，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸，在運(yùn)輸過...

腫瘤細(xì)胞在藥物心臟毒性篩選中的應(yīng)用

腫瘤細(xì)胞和誘導(dǎo)型人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的心肌細(xì)胞相似,具有相同的形態(tài)結(jié)構(gòu),且隨著培養(yǎng)時(shí)間的推移,功能性K+、Na+、Ca2+通道密度逐漸增加、心肌特異性基因ANF、α-MHC、MLC-2a的表達(dá)量增加,具有相似的動(dòng)作電位時(shí)程和收縮性等特點(diǎn),相當(dāng)于幼稚型心肌細(xì)胞。將它們應(yīng)用于已知作用藥物的心臟毒性篩選,檢測心肌細(xì)胞離子通道、動(dòng)作電位、心臟損傷標(biāo)志物、收縮功能的變化,獲得與臨床相似的結(jié)果。因此,建立人胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)型人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化心肌細(xì)胞的體外評(píng)價(jià)模型,大大減少了藥物的時(shí)間...