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原代細胞活力評估難度低

傳統的原代細胞培養主要是通過顯微鏡下形態學變化以及傳代培養周期的變化預估細胞生長生存狀態。這種主觀判斷既無法量化，也無法進行統計學分析。因此，目前對細胞存活質量的判斷并沒有準確、客觀的統一標準，并且對體外培養細胞的存活質量控制往往被科研工作者們“忽略”，從而導致實驗結果的不穩定。體外細胞的有效培養新概念——“細胞質控”。通過細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷五方面對細胞生長生存狀態進行的監控。在這五個方面中，影響zui大的便是細胞活力，下面咱們專門來談一談細胞...

細胞株為何不貼壁？

總結細胞株不貼壁可能原因如下：●胰蛋白酶消化過度●支原體污染●培養基pH值過堿（NaHCO3分解）●細胞老化●接種細胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物●使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2●細胞株啟用新的保種細胞●調節*接種細胞濃度150mgPygeumExtract94279-95-5水楊梅提取物標準品150mgPheniramineMaleate132-20-...

原代細胞實驗中淋巴細胞轉化的實驗

原代細胞實驗中正常機體的T淋巴細胞在體外培養過程中受到特異性抗原或有絲分裂原刺激。可轉化為淋巴母細胞。細胞免疫缺陷時，患惡性腫瘤或某些其他疾病時。轉化率顯然降低。目前zui常用植物血凝素（PHA）作為分裂原來檢測受試者的淋巴細胞轉化率，從而判定其細胞免疫功能，稱為PHA刺激淋巴細胞實驗的轉化實驗。實驗材料肝素試劑、試劑盒199培養液小牛血清鏈霉素青霉素PHA儀器、耗材注射器針頭試管吸管離心機實驗步驟1.采肝素抗凝血1~2毫升（1毫升血中加肝素20單位）充分混勻。37℃靜置1~...

細胞株凍存技術綜述

細胞株實驗室低溫保存設備包括：液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低溫保存箱、-86℃超低溫冰箱、程控降溫儀、低溫冰箱（-20℃、-30℃、-40℃）、藥品保存箱、疫苗保存箱、血庫冰箱、層析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。檢驗冰箱可靠性和制冷能力的方法：1、常規冰箱放置溫度計；2、超低溫冰箱放置加熱器、大量樣品或反復開門凍存保護劑很多化合物都可以作為凍存保護劑，它們既可以單獨使用也可以聯合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準則，但是大家普遍認為二甲基亞砜（DMSO...

原代細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟

原代細胞實驗試劑1.細胞營養液（DMEM液體培養基，10％胎牛血清，雙抗100單位/ml），消化液（0.05％胰酶，0.53mMEDTA·Na），Hank’s液。2.2×HBS液（280mMNaCl,10mMKCl,1.5mMNaHPO4·2H2O,12mM葡萄糖，50mMHepes，pH7.05,0.2μ過濾除菌），CaCl2（2.5M，0.2μ過濾除菌）溶液，超純水（滅菌）。3.PBS，蛋白酶K，NP40，RNaseA，無水乙醇，酚，DNA上樣緩沖液，瓊脂糖，TAE電泳緩...

原代細胞進行重組的方法

原代細胞成人非肌肉組織（比如皮膚或血液）的iPS細胞進行重組，使其退回到原始狀態，然后加入大量Pax7分子，向細胞發送信號，讓其開始變成肌肉。隨著細胞不斷增多，它們變得非常類似成人肌肉干細胞。隨后，研究人員停止供應Pax7信號分子，并為這些細胞提供支持和營養，讓其*發育成熟。結果表明，經過2周到4周的三維培養，得到的肌肉細胞會形成能像人體肌肉組織一樣收縮并對外部刺激作出反應的肌肉纖維。當植入成年老鼠體內，這些肌肉纖維能存活且運作至少3周，并通過血管化過程，與老鼠自身組織融合到...

原代細胞敏銳的判斷力

原代細胞表面一定需要一個CD47的“信號接收器”，那就是信號調節蛋白α（SIRPα）。那么這是不是意味著，如果在體內抑制SIRPα的表達，巨噬細胞就可以恢復敏銳的判斷力，吞噬癌細胞了呢？這并不是一個新鮮的想法，有不少科學家都在開發CD47抗體，阻止它與SIRPα結合。然而，這些藥物往往都存在一個共同問題：巨噬細胞會變得“敵我不分”，在減小了腫瘤的同時，也迅速消滅了血液循環中的血細胞，這除了會引起貧血外，更嚴重的是會導致自身免疫疾病，結果接受治療的小鼠沒被腫瘤“害死”，倒是先倒...

原代細胞在再生醫學中的應用

原代細胞在再生醫學中的應用前景巨大，遺傳物質穩定是其安全應用的前提。和分化細胞相比，干細胞的細胞周期短，DNA復制頻繁，且細胞周期中G1期十分短暫，并缺乏G1細胞周期檢查點，這些特征使干細胞在DNA復制中面臨巨大的復制壓力。復制壓力是內源性DNA損傷和基因組不穩定的主要來源，有效處理復制壓力是細胞維持遺傳物質穩定性的重要途徑。目前，干細胞如何有效處理復制壓力尚不清楚。鄭萍課題組研究了多能干細胞對DNA復制壓力的處理能力及分子機制。通過系統比較小鼠胚胎干細胞和不同類型的快速分裂...