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人類外周血淋巴細胞的培養(yǎng)方法

實驗原理染色體是在顯微鏡下可見細胞系有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。因此，必須獲得染色體標本才能進行檢查分析，通常情況下，都是利用外周血淋巴細胞進行核型分析。正常情況下，人體外周血淋巴細胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細胞，使其恢復增殖能力。因此，可采取少量外周靜脈血，做短期培養(yǎng)，培養(yǎng)至72小時細胞進入增殖旺盛期，此時加入秋水仙素抑制細胞分裂，使細胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細胞，經(jīng)低滲、固定、制片、染色后鏡下觀察進行核型分析。上述制備的染...

細胞長期保存的方法

細胞系長期低溫冰凍必然會導致部分細胞死亡，而且很多時候我們要把細胞樣本拿來重新接種做實驗，所以解凍再凍的過程也會導致細胞死亡。那么起始樣本的細胞濃度就要達到一定的高度，這樣在以后保存的過程中就算死亡一些細胞，我們也還有很多有效細胞可以用，一般來說這個起始細胞密度要達到10的七次方的樣子（單位：細胞/mL）。除了常見抗凍劑甘油外，我們也會添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質(zhì)用來吸附在細胞表面形成保護薄膜，防止在冷凍過程中對細胞的破壞。...

原代細胞培養(yǎng)過程可能出現(xiàn)的問題及解決辦法

原代細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度●支原體污染●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）●細胞老化●接種細胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2●啟用新的保...

細胞株培養(yǎng)時消毒滅菌的方法

細胞株嚴格的消毒滅菌對保證細胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學消毒劑等。①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。②蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121....

ATCC細胞株解凍和培養(yǎng)操作推薦

凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后，可以立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復蘇培養(yǎng)細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會立即下降。ATCC細胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單，其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到，產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細胞株具體批次的檢測報...

原代細胞保存的主要方法之一細胞凍存

利用凍存技術(shù)將原代細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細...

原代細胞培養(yǎng)基的保存方法分析

原代細胞培養(yǎng)基的保存方法分析1.干粉，買了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我認為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。2.配好的無血清培養(yǎng)基一定保存在4度，保存不要超過3個月。用時根據(jù)提示要加入谷胺酰胺。3.加入血清的培養(yǎng)基，保存在4度不要超過1個月，從時間太長，活性下降。當然稍微長點也不一定出問題。但是根據(jù)細胞而定;如果原代培養(yǎng)，新鮮，如果是原代細胞，或僅維持傳代就不太要緊。但是原則是越新越好。786-O[786-0],人腎透明腺癌細胞HumanHEC-1A...

原代細胞如何消除組織培養(yǎng)的污染

原代細胞當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。①在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)原代細胞傳代的濃度。...