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原代細胞實驗室檢測方法

原代細胞實驗室檢測（一）包涵體的檢測。1.血片及白細胞涂片制備采集的抗凝血標本盡快用血球層推血片，待干燥后冷丙酮固定10min；或提取抗凝血中的白細胞并進行涂片，待干燥后冷丙酮固定10min。2.染色通常采用瑞氏（Wright）染色法、姬氏（Giemsa）染色法及瑞－姬混合染色法。有條件的實驗室，可使用美國CDC推薦的染色方法。3.染液配置方法（1）瑞－姬染液：取瑞氏染料和姬氏染料各0.5g，以甲醇研溶，加甲醇500ml保存，每天搖勻１次，１周后可使用。（2）改良McDona...

原代細胞增殖生長數值的步驟

測定原代細胞增長數值常用zui簡便的方法。一般過程為1.接種21孔/24孔板細胞（如用培養(yǎng)瓶時則21瓶）。2.分7組，每組3孔（或瓶），培養(yǎng)一周（7天），期間逐日檢測一組，計數。3.把7天中的細胞數值繪成圖，即為細胞生長曲線。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰蛋白酶儀器、耗材吸管實驗步驟1.懸液制備取待測生長狀態(tài)良好細胞，增長至接近匯合時，向培養(yǎng)瓶內加1ml升0.25%胰蛋白酶液，37℃溫箱中消化，至細胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養(yǎng)液、輕吹打制備成細懸液、計數；2.接種向每孔...

保持原代細胞其多能性的蛋白質的方法

蛋白質Tet能幫助原代細胞保持多能性。Zhang研究組分析了Tet1在整個小鼠胚胎干細胞基因組中的存留時間。他們發(fā)現(xiàn)Tet1采用雙管齊下的辦法維持小鼠胚胎干細胞的狀態(tài)。一方面，Tet1可對分化起重要作用的基因保持"沉默"；另一方面Tet1也可激活多能性基因。研究組著重于研究Tet1催化反應產物-5羥甲基胞/嘧啶。5羥甲基胞嘧啶是胞嘧啶的修改版-C在四個主要的DNA堿基：A、T、G、C。5羥甲基胞嘧啶和5甲基胞嘧啶分別被稱為是DNA第五、第六個堿基，但是5羥甲基胞嘧啶是zui近...

如何判斷原代細胞污染了？

狀態(tài)1：原代細胞培養(yǎng)液變渾濁了，經常見到是米湯樣，黃色液體，一般認為細菌污染。狀態(tài)2：細胞培養(yǎng)基內含有能動的小黑點，一般認為是黑膠蟲。狀態(tài)3：胞培養(yǎng)基清亮，但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質，有可能就是真菌感染。策略：細胞污染了就直接扔了，還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈，并用紫外照射半小時，防止再次污染。同時建議細胞培養(yǎng)時，在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素(尤其是初學者)細胞培養(yǎng)過程中，細胞周圍包括細胞上有很多小黑點，怎么辦?策略1：用胰酶消化下來后，低速短時間離心，不同實驗室...

腫瘤細胞活力評估難度低

傳統(tǒng)的腫瘤細胞培養(yǎng)主要是通過顯微鏡下形態(tài)學變化以及傳代培養(yǎng)周期的變化預估細胞生長生存狀態(tài)。這種主觀判斷既無法量化，也無法進行統(tǒng)計學分析。因此，目前對細胞存活質量的判斷并沒有準確、客觀的統(tǒng)一標準，并且對體外培養(yǎng)細胞的存活質量控制往往被科研工作者們“忽略”，從而導致實驗結果的不穩(wěn)定。體外細胞的有效培養(yǎng)新概念——“細胞質控”。通過細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷五方面對細胞生長生存狀態(tài)進行的監(jiān)控。在這五個方面中，影響zui大的便是細胞活力，下面咱們專門來談一談細胞...

原代細胞中的核糖核酸可分為哪些種類？

根據原代細胞結構和功能的不同，細胞中的RNA可分為三類：即信使（mRNA）、轉運RNA（tRNA）和核糖體RNA（rRNA）。mRNA以DNA為模板，在RNA聚合酶的催化下，按堿基互補原則，從分子的5，末端向3，末端方向在細胞核內合成，因此，mRNA分子能準確地傳遞DNA鏈上的遺傳信息。合成后的mRNA經核孔進入細胞質，并與核糖體結合，將單核糖體連成多核糖體。由于細胞內的基因和基因組很多，而mRNA是根據要表達的基因或基因組合成的，因此mRNA種類復雜多樣。tRNA是RNA中...

原代細胞培養(yǎng)新技巧

研究人員發(fā)現(xiàn)了一個能提高人類原代細胞，以及誘導多能干細胞iPS三倍數量的新方法，而且這種方法還無需一般培養(yǎng)方法中都需要的小鼠飼養(yǎng)細胞。胚胎干細胞和iPS細胞由于其杰出的再生能力，吸引了眾多科學家，這些多能干細胞是許多疾病的新希望，比如帕金森癥，阿茲海默癥等，也是篩選信號的新方向，同時這些細胞還能為糖尿病，神經或其它組織損傷提供移植治療細胞。但是這些技術應用需要百萬，甚至千萬的細胞，目前的培養(yǎng)方法無法達到這一需求。而的這篇文章在之前研究的基礎上——幫助研究人員了解了*的表面化合...

如何對原代細胞進行保存和培養(yǎng)？

原代細胞形成的單層細胞匯合以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生成空間不足或由于細胞密度過大引起營養(yǎng)枯竭，都將影響細胞的生長，這一程序常稱為傳代或傳代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)在傳代時即為細胞系，能連續(xù)培養(yǎng)下去的為連續(xù)細胞系；不能連續(xù)培養(yǎng)的為有限細胞系。通常，傳代培養(yǎng)是指擴大培養(yǎng)，也就是將一份細胞一分為二或者一分為三進行培養(yǎng)等。但嚴格說來，不論稀釋與否，將細胞從一個培養(yǎng)瓶轉移或移植到另一個培養(yǎng)瓶即稱為傳代或傳代培養(yǎng)。可以理解，在任何時候，細胞從一個瓶子接種到另一個瓶子時總會丟失一部分，因...