細胞簡介：

產品名稱 小鼠牙周膜成纖細胞

簡稱 PDLFs

組織來源 牙周膜組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 小鼠牙周膜成纖細胞分離自牙周膜組織；牙周膜（牙周韌帶、牙周間隙）是由致密結締組織所構成。多數纖排列成束，纖的端埋于牙骨質內，另端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內；牙周膜內有神經、血管、淋巴和上皮細胞等。成纖細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在定條件下，它可以實現跟纖細胞的互相轉化；成纖細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的牙周膜成纖細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30 min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6 h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖細胞（PLFs）作為牙周膜的主體細胞，是牙周膜主要的間質細胞，它不僅具有合成膠原、基質、彈力纖和糖蛋白的功能，還有吸收膠原吞噬異物的能力，還參與了牙周組織的病變、修復及再生過程。現在，利用牙周膜細胞建立體外模型，已經成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段。

方法簡介 實驗室分離的小鼠牙周膜成纖細胞采用膠原酶-聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的小鼠牙周膜成纖細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 小鼠牙周膜成纖細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3代左右

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。