細胞簡介：

產品名稱 小鼠脾臟單核細胞

組織來源 脾臟

產品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 小鼠脾臟單核細胞分離自脾臟組織；脾臟是機體的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，是機體細胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處，與9-11肋相對，長軸與第10肋致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰，前方有胃，后方與左腎、左腎上腺毗鄰，下端與結腸脾溝相鄰，地柔軟的網狀內皮細胞器官。單核細胞（monocytes）是體積的白細胞。其細胞核常偏位，呈多形性，如卵圓形、腎形（a）、馬蹄形（b）、不規(guī)則形（c）等，常有折疊感（c）；染色質呈疏松網狀，著色較淺。胞質較多，嗜堿性，但因含大量細小的嗜天青顆粒而染成灰藍色，顆粒含過氧化物酶。單核細胞是血液中的血細胞。目前認為它是巨噬細胞的前身，具有明顯的變形運動，能吞噬、清除受傷、衰老的細胞及其碎片。單核細胞還參與免疫反應，在吞噬抗原后將所攜帶的抗原決定簇轉交給淋巴細胞，誘導淋巴細胞的特異性免性反應。單核細胞也是對付細胞內致病細菌和寄生蟲的主要細胞防衛(wèi)系統，還具有識別和殺傷腫瘤細胞的能力。淋巴細胞則為具有特異性免疫功能的細胞。T淋巴細胞主要參與細胞免疫反應而B淋巴細胞參與體液免疫反應。

方法簡介 實驗室分離的小鼠脾臟單核細胞采用密度梯度離心法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的小鼠脾臟單核細胞經CD14免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 小鼠脾臟單核細胞 培養(yǎng)基(基礎培養(yǎng)基，含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 半貼壁半懸浮

細胞形態(tài)： 巨噬細胞樣

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 不增殖；不傳代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養(yǎng)?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。