細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱(chēng) 兔羊膜胚胎細(xì)胞

組織來(lái)源 羊膜組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 兔胚胎羊膜細(xì)胞分離自羊膜組織；羊膜為單層上皮細(xì)胞互相連接構(gòu)成的薄膜。單層上皮細(xì)胞具有分泌羊水的作用。隨著胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育，羊膜與絨毛密切緊貼，形成胎膜。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴(kuò)大而呈半透明的薄膜，無(wú)血管，富有韌性（胎膜也就是羊膜腔的囊壁）。羊膜腔內(nèi)充滿(mǎn)的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤(pán)的兒體面，并不深入胎盤(pán)組織中，隨著妊娠的進(jìn)展羊膜腔逐漸擴(kuò)大，占據(jù)整個(gè)子宮腔，羊膜是胎膜內(nèi)層，是層半透明的薄膜，與覆蓋在胎盤(pán)、臍帶的羊膜層相連接。羊膜是胎盤(pán)的內(nèi)層，與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細(xì)胞，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì)，其光滑，無(wú)血管、神經(jīng)及淋巴，具有定的彈性，厚0.02-0.5 mm，在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為i、iii、iv、v、vii型膠原和纖粘連蛋白、層粘連蛋白等成份，正是這些成份使羊膜可以充當(dāng)“移植的基底膜"而發(fā)揮種新的健康合適的基質(zhì)。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的功能。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔羊膜胚胎細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔羊膜胚胎細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、 多聚-L-賴(lài)溶液（1×）或多聚-L-賴(lài)溶液（10×） 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）

培養(yǎng)基： 兔羊膜胚胎細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3-5代左右

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

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操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。