細胞簡介：

產品名稱 兔胚胎成纖細胞

組織來源 胚胎組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 兔胚胎成纖細胞（Rabbit Embryonic Fibroblasts, REFs）分離自胚胎組織，是從妊娠中期（通常為胚胎發育12.5-14.5天）的兔胚胎中分離獲得的成纖樣間質細胞，屬于貼壁生長的原代成纖細胞，具有典型的成纖細胞形態與生物學功能，是哺乳動物細胞生物學研究中常用的模式細胞之。般通過剔除胚胎的頭部、內臟（如心臟、肝臟）及四肢，保留軀干部分，酶消化分離獲得，典型形態為長梭形或不規則多邊形（生長形態特性與成纖細胞相似），呈貼壁生長，培養過程中易形成方向性排列，增殖能力較強（原代至P5代前增殖活躍，隨傳代次數增加逐漸出現衰老現象）；可分泌多種細胞因子（如白血病抑制因子LIF、成纖細胞生長因子FGF）、extracellularmatrix（ECM）成分（如膠原蛋白、纖連蛋白），為其他細胞生長提供微環境支持，能產生抑制ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子，故能有效地促進ES細胞的增殖并持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優于外源添加的些因子；表達成纖細胞特異性標志物（如波形蛋白Vimentin），不表達上皮細胞標志物（如角蛋白Cytokeratin）；可用于干細胞培養支持，作為胚胎干細胞（ESCs）、誘導多能干細胞（iPSCs）的飼養層細胞，通過分泌LIF持干細胞的未分化狀態與自我更新能力；體外研究模型，用于研究成纖細胞功能（如ECM合成、細胞遷移）、胚胎發育機制、纖化疾病（如肺纖化、肝纖化）的病理過程，以及藥物對間質細胞的作用效果；細胞衰老研究，REFs隨傳代自然衰老的特性，可用于探索細胞衰老的分子機制（如端粒縮短、氧化應激影響）及抗衰老藥物篩選；支持其他細胞培養，制備REFs條件培養基（培養REFs的上清液），為難以培養的細胞（如生殖細胞、神經細胞）提供生長所需的營養因子，或作為3D細胞培養的支架細胞構建類器官模型。不同種屬的胚胎成纖細胞，在基礎形態、貼壁生長特性、核心分泌功能及常規培養條件上高度致，但是存在種屬差異性，如細胞體積大小、分泌因子效果、對干細胞支持能力、可傳代次、藥物敏感性等等，般優選大鼠胚胎成纖細胞作為飼養層，需要依據不同實驗選擇適配。

方法簡介 實驗室分離的兔胚胎成纖細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的兔胚胎成纖細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 兔胚胎成纖細胞培養基(基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

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操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。