細胞簡介：

產(chǎn)品名稱 兔腸成纖細胞

組織來源 腸組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 兔腸成纖細胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)的微生態(tài)系統(tǒng)。各種哺乳動物腸的結(jié)構(gòu)和功能基本相似。腸壁結(jié)構(gòu)一般分4層，由外向內(nèi)依次為：漿膜層（腹腔臟層），平滑肌層，黏膜下層和黏膜層。平滑肌層的外層為縱行肌纖，內(nèi)層為環(huán)形肌纖，兩者都以螺旋式走行，它們以收縮和舒張來完成腸的機械性消化。黏膜層又分為3層：靠近黏膜下層的是一層平滑肌，稱為黏膜肌層。其次為結(jié)締組織，又稱為固有層。后面向腸腔的是一層柱狀上皮細胞構(gòu)成的黏膜。成纖細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。

方法簡介 實驗室分離的兔腸成纖細胞采用膠原酶-聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的兔腸成纖細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 兔腸成纖細胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數(shù)生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養(yǎng)?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細胞電特性（如鈉電流）。