商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 人腎足突細(xì)胞

組織來源 腎組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 人腎足突細(xì)胞分離自腎組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。足細(xì)胞（podocyte）即腎小囊臟層上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜（GBM）的外側(cè)，連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。足細(xì)胞特殊的解剖位置，使得其體內(nèi)研究較為困難；又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，又稱足突（FP），呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分，IV型膠原和纖維連接蛋白（FN）；在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬（MMPs）和組織，從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替，形成了許多30-40 nm的裂孔，孔上覆蓋一層厚4-6 nm的裂孔隔膜，即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過脈管系統(tǒng)的后屏障，對(duì)于維持腎小球?yàn)V過屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的人腎足突細(xì)胞采用機(jī)械研磨過不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的人腎足突細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 人腎足突細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液：0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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