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原代細(xì)胞
人原代細(xì)胞
YS-01X8300人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞圖片





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ARTICLES商品屬性:

產(chǎn)品名稱 | 人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞圖片 | 英文名稱 | Human Lymph Node Fibroblasts |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10^5 | 貨號(hào) | YS-01X8300 |
產(chǎn)品信息:

產(chǎn)品名稱 人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞
組織來源 淋巴組織
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
細(xì)胞簡(jiǎn)介 人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞分離自淋巴組織;淋巴結(jié)是呈橢圓形或蠶豆形的淋巴組織小體,大小不一,新鮮時(shí)呈灰紅色。穿插于淋巴管的行程中,并與淋巴管相通連。淋巴結(jié)主要由淋巴組織和淋巴竇組成,外面包以致密結(jié)締組織被膜,被膜向淋巴結(jié)內(nèi)伸入,形成許多間隔或小梁,構(gòu)成淋巴結(jié)的網(wǎng)狀支架,并把淋巴結(jié)實(shí)質(zhì)分隔成許多部分。這些結(jié)締組織由成纖維細(xì)胞構(gòu)成,對(duì)淋巴管起到保護(hù)和支持作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30 min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6 h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞采用混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:

自備試劑: 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基
培養(yǎng)基: 人淋巴結(jié)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含F(xiàn)BS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
換液頻率: 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性: 貼壁
細(xì)胞形態(tài): 成纖維細(xì)胞樣
傳代比例: 1:2
傳代特性: 可傳3-5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

取材與預(yù)處理?:取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠,麻醉后無(wú)菌取出肺組織,PBS沖洗去除血管和氣管?。
?消化?:剪碎肺組織,依次用0.2%膠原酶(37℃震蕩1h)和0.5%酶(消化30min)消化,終止后過濾?。
?純化?:采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞,離心后重懸接種?。
?培養(yǎng)?:使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,37℃、5% CO?培養(yǎng),24小時(shí)后換液?。
培養(yǎng)方法?:

原代細(xì)胞培養(yǎng)?
?材料?:新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)。
?步驟?:
取出肺組織,PBS沖洗去除血管和氣管,剪碎。
依次用膠原酶(37℃震蕩1h)和酶(消化30min)消化,終止后過濾。
通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞,離心后接種于培養(yǎng)皿。
37℃、5% CO?培養(yǎng),24小時(shí)后換液。
?注意事項(xiàng)?:消化時(shí)間需嚴(yán)格控制(胎鼠25分鐘,新生鼠40-60分鐘),避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
?細(xì)胞系培養(yǎng)?
?傳代?:0.25%消化1-2分鐘,加入含血清培養(yǎng)基終止,按1:2-1:4比例傳代。
?條件?:DMEM+10%胎牛血清,每周換液2-3次,37℃、5% CO?培養(yǎng)。
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