細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 人宮頸癌成纖維細(xì)胞

組織來(lái)源 宮頸癌組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 人宮頸癌組織源成纖維細(xì)胞分離自患有宮頸癌病人的宮頸癌組織；宮頸癌也稱子宮頸癌，指發(fā)生在子宮陰道部及宮頸管的惡性腫瘤，是女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，發(fā)病率位于女性腫瘤的第二位。宮頸癌可向鄰近組織和器官直接蔓延，向下至陰道穹窿及陰道壁，向上可侵犯子宮體，向兩側(cè)可侵犯盆腔組織，向前可侵犯膀胱，向后可侵犯直腸。也可通過(guò)淋巴管轉(zhuǎn)移至宮頸旁、髂內(nèi)、髂外、腹股溝淋巴結(jié)，晚期甚至可轉(zhuǎn)移到鎖骨上及全身其他淋巴結(jié)。血行轉(zhuǎn)移比較少見(jiàn)，常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移部位是肺、肝及骨。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細(xì)胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix, ECM）構(gòu)成，包括纖維細(xì)胞，免疫細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞等，腫瘤細(xì)胞通過(guò)調(diào)控這些間質(zhì)細(xì)胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉(zhuǎn)移的條件，從而使得腫瘤得到進(jìn)展。越來(lái)越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變?cè)谀[瘤進(jìn)展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究多也是主要的間質(zhì)細(xì)胞是腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞演化而來(lái)。宮頸癌組織源成纖維細(xì)胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的宮頸癌組織源成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30 min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6 h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人宮頸癌成纖維細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人宮頸癌成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人宮頸癌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖維細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。