細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 大鼠脾臟單核細(xì)胞

組織來(lái)源 脾臟

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 大鼠脾臟單核細(xì)胞分離自脾臟組織；脾臟是機(jī)體大的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處，與9－11肋相對(duì)，長(zhǎng)軸與第10肋一致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰，前方有胃，后方與左腎、左腎上腺毗鄰，下端與結(jié)腸脾溝相鄰，地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞器官。單核細(xì)胞（monocytes）是體積大的白細(xì)胞。其細(xì)胞核常偏位，呈多形性，如卵圓形、腎形（a）、馬蹄形（b）、不規(guī)則形（c）等，常有折疊感（c）；染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀，著色較淺。胞質(zhì)較多，嗜堿性，但因含大量細(xì)小的嗜天青顆粒而染成灰藍(lán)色，顆粒含過氧化物酶。單核細(xì)胞是血液中大的血細(xì)胞。目前認(rèn)為它是巨噬細(xì)胞的前身，具有明顯的變形運(yùn)動(dòng)，能吞噬、清除受傷、衰老的細(xì)胞及其碎片。單核細(xì)胞還參與免疫反應(yīng)，在吞噬抗原后將所攜帶的抗原決定簇轉(zhuǎn)交給淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的特異性免性反應(yīng)。單核細(xì)胞也是對(duì)付細(xì)胞內(nèi)致病細(xì)菌和寄生蟲的主要細(xì)胞防衛(wèi)系統(tǒng)，還具有識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。淋巴細(xì)胞則為具有特異性免疫功能的細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞主要參與細(xì)胞免疫反應(yīng)而B淋巴細(xì)胞參與體液免疫反應(yīng)。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脾臟單核細(xì)胞采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脾臟單核細(xì)胞經(jīng)CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑：0.25%、PBS、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：大鼠脾臟單核細(xì)胞培養(yǎng)基(含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：半貼壁半懸浮

細(xì)胞形態(tài)：巨噬細(xì)胞樣

傳代比例：不傳代

傳代特性：不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。