細胞簡介：

產品名稱 大鼠毛囊細胞

組織來源 毛囊組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠毛囊細胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是一根毛發，立毛肌的一側斜附在毛囊壁上，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結構比較復雜的器官附件組織。毛囊實際上是由結締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外，毛囊其余部分都是由表皮細胞分化而來。毛囊開口起始于皮膚表面，而每個毛囊又和一個或多個腺胞相連。每個腺胞解離成富含脂質的物質，卻又通過一個共同和毛囊相通連的皮脂腺導管將分泌物運送到皮膚表面排出。

方法簡介 實驗室分離的大鼠毛囊細胞采用-膠原酶聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠毛囊細胞經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑：0.25%、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1mg/mL）、PBS、培養基

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基：大鼠毛囊細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形、多角形

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

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操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。