細胞簡介：

產品名稱 大鼠精原細胞

組織來源 睪丸組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠精原細胞分離自睪丸組織；睪丸呈微扁的卵圓形，表面光滑，覆蓋著鞘膜臟層；深部是質地堅韌的白膜，在睪丸后緣增厚并進入睪丸，形成睪丸縱膈，縱膈發出許多睪丸小隔深入睪丸實質，將實質分為睪丸小葉，數量約為100-200。每個小葉內約有2-4條生精小管，具有產生精子的作用；生精小管之間的結締組織中有睪丸間質細胞，具有產生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管（也稱直精小管），精直小管進入睪丸縱膈形成睪丸網，之后睪丸網發出12-15條輸出小管通過睪丸后上緣進入附睪。生精小管的生精上皮是精子產生的地方，由生精細胞和支持細胞構成，成人的生精小管有30-70 cm長。精子的產生過程包括生精細胞的分化、支持細胞的作用、雄激素的調節等。生精細胞并不是一種細胞，它是多種細胞的統稱，包括精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞、精子。前者依次發育分化為后者，且依次從生精上皮的基部到管腔面排列，終形成精子進入到管腔之中，并借助生精上皮外側的肌樣細胞的收縮作用向下一級管腔移動。精原細胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細胞經過多次有絲分裂而形成的細胞。原始的胚細胞經分化形成精原細胞，精原細胞經復制形成初級精母細胞，初級精母細胞經過減數第一次分裂后形成次級精母細胞，再經過減數第二次分裂形成精細胞。精細胞經過變形終形成精子。精原細胞屬于雄性生殖細胞的早期發育階段，能不斷地進行有絲分裂，增加細胞數量，并分化為精母細胞。精原細胞貼近基膜，細胞呈圓形，核大而圓，梁色深。精原細胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力，而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀不變。在增殖過程中，通過精原細胞的分裂和分化，由精原細胞產生精母細胞，進入成熟分裂，因而通過增殖可大大增加精母細胞的數量。按理論推算，一個精原細胞通過數次細胞分裂，可形成上百個初級精母細胞。但在生精過程早期，生精細胞很易發生變性，故實際上少于這個數字。在精原細胞的增殖過程中，有一部分Ad型精原細胞不再繼續分裂，而是保留下來，成為新的精原干細胞，因此通過增殖不僅能使精原干細胞不斷得到更新，且能使精原干細胞保持一定數量，從而使精子的產生持續地進行下去，不會枯竭。

方法簡介 實驗室分離的大鼠精原細胞采用混合酶多步消化法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠精原細胞經AP（堿性磷酸酶）免疫組化染色鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑：0.25%、PBS、培養基

培養基：大鼠精原細胞培養基(含FBS、生長添加劑、GDNF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：圓形、橢圓形

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。