細胞簡介：

產品名稱 大鼠股骨頭微血管內皮細胞

組織來源 骨組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠股骨頭微血管內皮細胞分離自骨組織；股骨頭（caput femoris）呈圓形，約占一圓球的2/3，其上為關節軟骨所覆蓋，在其頂部微后有一小窩，稱為股骨頭凹，為股骨頭韌帶附著處，股骨頭可由此獲得少量血供。股骨頭骨髓的微血管結構為珊瑚狀，后毛細血管微動脈與微靜脈部分膨大、迂曲、互相纏繞；骨微血管內皮細胞構成了骨內微血管的內襯，與骨內其他成分聯系密切，參與了許多骨的病理生理過程在骨吸收新骨的形成血管再生營養物質轉運骨內代謝產物輸出及維持骨內微環境平衡方面具有重要作用。

方法簡介 實驗室分離的大鼠股骨頭微血管內皮細胞采用混合膠原酶消化制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠股骨頭微血管內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑：0.25%或Accutase細胞消化液、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）或明膠包被液（1mg/mL）、PBS、培養基

包被條件：PLL（0.1mg/mL）或明膠（0.1%）

培養基：大鼠股骨頭微血管內皮細胞 培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：內皮細胞樣

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳1-3代左右；2代以內狀態佳

消化液：0.25%

凍存步驟：

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凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

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操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。