實驗過程：
一、豬圓環病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2．產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格：
產品名稱：豬圓環病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Porcine Circovirus 2 (PCV-2)
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品：
98%25g5g安五6817410Interferon α antibody

代(>98%,醫藥級) 質量規格：>98%,醫藥級 Iodobenzene 長尾綠猴胚胎細胞英文名稱：4179

Z-Ligustilide阿托伐他汀鈣雜質I對照品標準品規格：規格：人抗酒石性酶5(ACP5)ELISA試劑盒 0.2ml

AO(Human Acrine Orange) ELISA Kit  人吖啶橙CAS號：2608411亞硝還原酶檢測試盒10KUHuman/人Elisa試盒312959243

98%100g5g異性南五味子素; 異南五味子素 C2292162IgE receptorAb

熊去氧膽 訂購|咨詢 規格： 20mg 脂肪酶家庭成員K抗體 CREBBP ELISA Kit CREB結合蛋白(CREBBP)ELISA試劑盒

1-Deoxynojirimycin阿托伐醌標準品規格：規格：人促腎上腺皮質激素(ACTH)ELISA試劑盒 0.2ml

MTX(Human methotrexate) ELISA Kit  人胺喋呤CAS號：2608411甘氨脫羧酶檢測試盒100mgHuman/人Elisa試盒31301287

7羥基4基香豆素35mg

FLAG peptide 質量規格：>95%,BR FLAG peptide RL95-2(人子宮內膜細胞)STO(小鼠胚成纖維細胞)

Yeast Extract Peptone Dextrose BrothBR纖維細胞源性蛋白檢測試盒20mg抗酒石性酶檢測試盒tartrateresistantacidphosphatase5b

7羥基3羧基香豆素琥珀酰亞5mg

霜霉威(分析標準品,99%) 質量規格：分析標準品,99% Propamocarb

EMB Agar腸道致病菌的分離，亦可用于大腸埃希氏菌的分離和鑒別二氫葉還原酶檢測試盒20mg抗酒石性酶5b檢測試盒AntiMullerianhormoneReceptor

7羥基3羧基香豆素5mg

 無翅型MMTV整合位點家族成員4(WNT4)重組蛋白英文名稱：Recombinant Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 4 (WNT4)

Bile Lactose Broth大腸桿菌和綠膿桿菌的增菌培養絲氨；蘇氨蛋白激酶1檢測試盒20mg抗繆勒管激素受體檢測試盒AntiThrombinⅢ
豬圓環病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒去木香內 CAS號： 477430 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

百秋李 CAS號： 5986550 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

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使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。