蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1(ASAH1)重組蛋白英文名稱：Recombinant N-Acylsphingosine Amidohydrolase 1 (ASAH1)Homo sapiens (Human，人)

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操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：

1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作 
DNAH9產(chǎn)品名稱: 軸絲動(dòng)力蛋白重鏈9抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Horse

AQP7產(chǎn)品名稱: 水通道蛋白-7抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow

Caldesmon產(chǎn)品名稱: 鈣介質(zhì)su抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Rabbit

PSME3產(chǎn)品名稱: 蛋白mei體激活因子PA28γ抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

NMDAR1產(chǎn)品名稱: 離子型谷氨suan受體1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow

MESP1產(chǎn)品名稱: 心發(fā)育中胚層相關(guān)蛋白1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow

SOAT2產(chǎn)品名稱: 酰基轉(zhuǎn)移mei2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

DUSP27產(chǎn)品名稱: 雙重特異性磷suanmei27抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

EPLIN產(chǎn)品名稱: 惡性腫丟失蛋白EPLIN抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Dog, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

INTS1產(chǎn)品名稱: INTS1蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep   

腺苷酸環(huán)化酶6(ADCY6)重組蛋白人肌球蛋白Ⅵ(MYO6)ELISA試劑盒MYO6肌球蛋白Ⅵelisa kitHuman Myosin VI(MYO6)ELISA Kit

人肌球蛋白ⅤC(MYO5C)ELISA試劑盒MYO5C肌球蛋白ⅤCELISA試劑盒Human Myosin VC(MYO5C)ELISA Kit

人肌球蛋白ⅤB(MYO5B)ELISA試劑盒MYO5B肌球蛋白ⅤBelisamei聯(lián)免疫試劑盒Human Myosin VB(MYO5B)ELISA Kit

人肌球蛋白ⅢB(MYO3B)ELISA試劑盒MYO3B肌球蛋白ⅢBelisa檢測(cè)試劑盒Human Myosin IIIB(MYO3B)ELISA Kit

人肌球蛋白ⅢA(MYO3A)ELISA試劑盒MYO3A肌球蛋白ⅢAelisa kitHuman Myosin IIIA(MYO3A)ELISA Kit