產(chǎn)品名稱：α酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）測(cè)試盒規(guī)格

規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣

測(cè)試方法:微量法、紫外分光光度法

貨號(hào)：YS-01S6446

測(cè)定意義

α-KGDH（EC 1.2.4.2）廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶。

測(cè)定原理

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶生成琥珀酰輔酶、 二氧化碳和 NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失，請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明！

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 。

4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對(duì)于一般的分光光度法來說,其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速

Anti-phospho-c-Raf (Ser338) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit Anti-Bovine IgG 兔抗IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg

GDNF家族受體α-1抗體 Anti-GFRα-1/GDNF 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml

FAR2 英文名稱： 脂肪酰A還原酶2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Smad1(Ser206) 磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgG 兔抗IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg

PHD3 (Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3) 脯氨酸羥化酶(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化腎上腺素能受體β2抗體 規(guī)格 0.1ml

Mast Cell Tryptase 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝

USE1 英文名稱： 囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Use1抗體 0.2ml

CHODL 英文名稱： 軟骨凝集蛋白CHODL抗體 0.1ml

Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

SKP1 英文名稱： S期激酶相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml

alpha Elastin 英文名稱： α彈性蛋白抗體 0.1ml

轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體1抗體 Anti-TGF-βR1/ALK 0.1ml

Anti-TM/FITC 熒光素標(biāo)記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-LAT (Tyr191) 磷酸化T細(xì)胞活化連接蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

OPN 骨橋蛋白(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
α酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）測(cè)試盒規(guī)格乙酰基乙酰苯(>99%,BR)五味子酯甲CY5蛋白標(biāo)記試劑盒

溴化乙酰膽(>98%,BR)五味子乙SULFORHODAMINE蛋白標(biāo)記試劑盒

酮肟(>98%,BR)煙酰抗體/蛋白HRP標(biāo)記制備試劑盒

化乙酰膽(>98%,BR)西紅花苷抗體/蛋白AP標(biāo)記制備試劑盒

酸性藍(lán)29(>50%，Ind Grade)西紅花苷I抗體/蛋白生物素標(biāo)記制備試劑盒

酸性藍(lán)40(>50%,BS)西紅花苷II抗體蛋白質(zhì)A標(biāo)記制備試劑盒

酸性品紅6B(>50%,BS)桑色素病HRP標(biāo)記制備試劑盒

吖啶鹽酸鹽(>98%，BS)D-(-)-奎寧酸蛋白電泳2倍樣品處理液