原代細(xì)胞細(xì)菌污染

    細(xì)胞中如果污染細(xì)菌，zui常見的有枯草桿菌等革蘭陽性菌以及大腸桿菌、假單孢菌等革蘭陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見。培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會(huì)很快出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH 改變。

    也有少數(shù)培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變，只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以，每天應(yīng)仔細(xì)觀察。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，zui后變圓脫落死亡，造成實(shí)驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失。

    細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。

    如何預(yù)防

         仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠、壓力足夠。
        

            重點(diǎn)檢查和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意。
        

            下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象，可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理。
    霉菌污染     

    霉菌污染以后，培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37 度孵箱培養(yǎng) 2-3 天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)。鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間長(zhǎng)之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差。

    用硫酸銅溶液擦拭 CO2 孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體, 可以防止霉菌污染。

    CO2 孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2 月左右），尤其在多雨的季節(jié)。

    其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用 84 液擦洗－清水擦洗－75% 酒精擦洗－紫外燈照。

    如何預(yù)防

        可在培養(yǎng)基里加 3u/mL 的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素 D 或雙抗。
        

       細(xì)胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素 D 或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。
        

         將環(huán)境*消毒，如果所有原代細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
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原代細(xì)胞